细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下:
1.细菌污染
细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据gan染菌的种类不同,可能会呈现不同的形状,培养液一般会变得浑浊、黄色,对细胞生长有明显影响。
解决方法:仔细检查器具的灭菌情况,确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。重要的是,与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次,则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意!下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外,建议在培养基中添加抗生su。将上层细胞悬液倒入一个装有10mlMEF生长培养基的50ml离心管中,用200目的尼龙网过滤后,以1500rpm离心5分钟收集细胞,再用30mlMEF生长培养基洗涤两次。
关于细胞培养的常见问题:
Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理?
A: 贴壁细胞在移除原培养液后,用 PBS 冲洗 2-3 遍;悬浮细胞离心移除原培养液后,加入 PBS 重悬,离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍,用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
Q:细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗?
A:长期保存的细胞应当放在液氮(-196℃)中保存,短时间(一般 1 周-2 周)可以存放在 -80℃。
Q:培养瓶是用密封盖好,还是用透气盖好?
A:都可以。只是在使用密封盖培养瓶时,瓶盖旋至约 2/3,不要完全拧紧,预留约 1/3 以便细胞可以透气;有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS?
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别,都是指胎牛;FCS 不是正规命名,尽量不使用。Calf Serum(CS)则是指小牛。Horse Serum(HS)则是指马。
Q:中可能出现的沉淀物是什么?
A:基于多年的实验研究,用于细胞培养的胎牛以及其它中可能会存在以下种类的沉淀物:
(1)纤维蛋白,它是经常出现的较大的沉淀物,可以达到 1-2mm,可以用肉眼观察到。因为都是在低温下进行收集和快速处理的,一些纤维蛋白原(可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体)在处理过程中仍然处于溶解状态,当经过的过滤分装后,就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。从而使得研发或生产者不必以杂交瘤细胞为载体保留该,而可以以碱基序列的形式进行保存和传播交流、鉴定。
(2)磷酸钙,它也是常见的一种沉淀物,通常会使出现浑浊,并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点, 这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动,因此经常被误认为是微生物污染。
(3)胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是中出现沉淀物的常见原因。
以上就是关于陕西细胞实验外包公司货真价实「在线咨询」冬日姜饼全部的内容,关注我们,带您了解更多相关内容。